菌落計數器是微生物實驗室常用設備，用于平板菌落計數，核心是通過放大、照明輔助人工計數，部分型號可自動識別計數。以下為通用操作流程，不同品牌（如歐萊博、其林貝爾、賽默飛）細節略有差異，需結合儀器說明書調整。
一、實驗前準備
儀器檢查
檢查電源線、數據線連接是否牢固，計數筆（或感應探頭）、放大鏡鏡頭是否清潔。
開啟儀器電源，預熱5-10分鐘，確保顯示屏、照明光源正常工作。
樣品準備
待計數的平板需培養至菌落形態清晰（細菌一般培養24-48h，真菌48-72h），表面干燥無冷凝水。
標記平板信息（樣品編號、稀釋倍數等），避免混淆。
耗材與環境
準備酒精棉片、記號筆、計數記錄表格。
操作環境保持清潔，避免雜菌污染平板；光線柔和，防止反光影響計數。
二、手動菌落計數器操作步驟
市面上多數實驗室使用手動菌落計數器，核心流程如下：
放置平板
將培養皿倒扣在計數器的載物臺中央，調整載物臺位置，使平板完全處于放大鏡視野內。
打開底部或頂部照明光源，調節亮度至菌落與培養基對比清晰，無刺眼反光。
設定參數（部分型號）
若儀器支持稀釋倍數設置，按面板按鍵輸入樣品的稀釋倍數（如10??），儀器可自動計算最終菌落數。
部分儀器有計數模式選擇（如總菌落計數、特定顏色菌落計數），按需切換。
開始計數
手持計數筆，從平板的一個邊緣開始，按順時針/逆時針方向有序掃描，避免重復或遺漏。
每發現一個菌落，輕按計數筆一次，儀器顯示屏會自動累加計數數值；遇到融合的菌落簇（如菌苔邊緣），若無法區分單菌落，按“一簇記為一個”或“按經驗估算”（需在記錄中注明）。
對于透明或微小菌落，可適當調節放大鏡焦距，必要時借助菌落形態特征（大小、顏色、邊緣）判斷。
重復計數（平行驗證）
同一塊平板建議計數2次，兩次數值誤差應≤10%，取平均值；若誤差過大，需重新計數。
同一稀釋度至少計數2-3個平行平板，減少實驗誤差。
數據記錄與計算
記錄平板計數原始值、稀釋倍數、平行平板數量。
計算公式：樣品菌落總數（CFU/g或CFU/mL）=平板平均菌落數×稀釋倍數÷接種量
示例：接種0.1mL稀釋10?³的樣品，平板平均菌落數為50，則總數=50×10³÷0.1=5×10?CFU/mL。
實驗后清理
關閉儀器電源，拔下電源線。
用酒精棉片擦拭載物臺、放大鏡鏡頭、計數筆探頭，去除培養基殘留或污漬。
清理實驗臺面，將平板按生物安全要求分類處理（滅菌后丟棄）。
三、自動菌落計數器操作要點（進階型）
自動菌落計數器通過圖像識別技術計數，操作更高效，步驟如下：
放置平板，開啟儀器，進入圖像采集模式。
調節攝像頭焦距和光源強度，拍攝平板清晰圖像，部分儀器支持自動對焦。
在軟件界面設置菌落識別參數（如菌落大小閾值、顏色范圍），排除培養基雜質干擾。
點擊“自動計數”，軟件自動識別并統計菌落數，可手動修正誤判的雜質或漏計的菌落。
導出數據至電腦，保存計數報告。
四、注意事項
計數規范：選擇菌落數在30-300CFU的平板計數，超出此范圍的平板數據無效（菌落過多易融合，過少誤差大）。
生物安全：操作活菌平板時需佩戴手套、口罩，避免氣溶膠污染；實驗后平板需高壓蒸汽滅菌。
儀器維護：定期校準計數精度，保持鏡頭清潔；避免儀器受潮、暴曬，長期不用時斷開電源。
避免誤差：計數時遵循“有序掃描”原則，可在平板背面劃分象限，按象限計數；不同操作者計數前需統一判斷標準。
